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2026-01-01T08:22:34Z

Einzelnachweise

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Das '''Yeast One-Hybrid-System''' (''Y1H'', zu deutsch ‚Hefe-Ein-Hybrid-System‘) dient zur Identifizierung neuer [[Protein-DNA-Interaktion]]en, ist aber auch geeignet, bekannte oder vermutete Protein-DNA-Interaktionen zu bestätigen und zu charakterisieren.<ref>J. S. Reece-Hoyes, A. J. Marian Walhout: ''Yeast one-hybrid assays: a historical and technical perspective.'' In: ''Methods (San Diego, Calif.).'' Band 57, Nummer 4, August 2012, {{ISSN|1095-9130}}, S. 441–447, [[doi:10.1016/j.ymeth.2012.07.027]], PMID 22884952, {{PMC|3448804}}.</ref><ref>M. Sieweke: ''Detection of transcription factor partners with a yeast one hybrid screen.'' In: ''Methods in Molecular Biology.'' Band 130, {{ISSN|1064-3745}}, 2000, S. 59–77, PMID 10589421.</ref>

== Prinzip ==
Um neue Interaktionen zu finden ([[Screening]]), wird zwischen einem Protein-zentrierten und einem DNA-zentrierten Ansatz unterschieden. In beiden Fällen signalisiert die Aktivierung eines [[Reportergen]]s, das z. B. der Backhefe [[Saccharomyces cerevisiae]] eine [[Antibiotikaresistenz]] vermittelt, dass es zu einer Interaktion kommt.

=== Suche nach DNA-Bindungssequenzen für ein Protein ===

Die cDNA des zu untersuchenden Proteins wird in einen [[Vektor (Gentechnik)|Vektor]] [[klonieren|kloniert]], der für eine [[Transaktivierungsdomäne|transkriptionelle Aktivierungsdomäne]], meistens die des [[Transkriptionsfaktor|Hefetranskriptionsfaktors]] ''GAL4'', [[Genetischer Code|codiert]]. Mit der in [[Escherichia coli]] [[Amplifikation (Genetik)|amplifizierten]] DNA wird ein Hefestamm stabil transformiert. Die Zellen exprimieren das zu untersuchende Protein als [[Fusionsprotein]] mit einer Aktivierungsdomäne. Die Hefen werden jetzt mit einer Reportergen-[[Genbibliothek|Bibliothek]] transformiert, in deren [[Promotor (Genetik)|Promotor]] zuvor je ein DNA-Fragment, z. B. [[Restriktionsverdau|Restriktionsfragmente]] genomischer Maus-DNA, kloniert wurde. Kommt es zu einer Interaktion mit dem Fusionsprotein, wird das Reportergen aktiviert und die Hefe bildet auf geeigneten Platten [[Kolonie (Biologie)|Kolonie]]n.

=== Suche nach Proteinen, die an ein DNA-Element binden ===

Im ersten Schritt werden Hefezellen mit einem Reportergenplasmid transformiert, in dessen Promotor das zu untersuchende DNA-Element kloniert wurde. Die Hefen werden jetzt mit einer [[cDNA]]-Bibliothek von Plasmiden, die für eine transkriptionelle Aktivierungsdomäne codieren, [[Transformation (Genetik)|transformiert]]. Hefen, die Fusionsproteine exprimieren, welche an die Zielsequenz binden, erwerben eine [[Antibiotikaresistenz]].
Häufiger angewendet wird die Suche nach Transkriptionsfaktoren für regulatorische Sequenzen aus Promotoren und [[Enhancer (Genetik)|Enhancer]]. In beiden Fällen werden die Plasmide aus den selektionierten Hefekolonien isoliert und identifiziert. In der Regel wird die Protein-DNA-Interaktion mit anderen Methoden, wie dem [[EMSA]], verifiziert.

Das [[Bacterial One-hybrid system]] ist ein vom Yeast-One-Hybrid-System abgeleitetes Verfahren zur Ermittlung von DNA-Protein-Interaktionen in Bakterien. Das [[Yeast-Two-Hybrid-System]] ist eine Untersuchungsmethode für [[Protein-Protein-Interaktion]]en.

== Weblinks ==
* [http://www.clontech.com/US/Products/Protein_Interactions_and_Profiling/Yeast_One-Hybrid/Matchmaker_Gold_Yeast_One-Hybrid_System Yeast One-Hybrid System] clontech
* M. Liao, F. Fang: ''[Yeast one-hybrid system-one effective method studying DNA-protein interaction].'' In: ''Zhongguo yi xue ke xue yuan xue bao. Acta Academiae Medicinae Sinicae.'' Band 22, Nummer 4, August 2000, S. 388–391, PMID 12903457 (Review).
* [http://www.meduniwien.ac.at/user/johannes.schmid/2009SSM3.pdf Yeast 1 und 2-Hybridisierung] (PDF; 1,5 MB) S. 17

== Einzelnachweise ==
<references />

[[Kategorie:Nukleinsäure-Methode]]
[[Kategorie:Genetik]]
[[Kategorie:Protein-Methode]]
[[Kategorie:Biochemisches Nachweisverfahren]]
[[Kategorie:Hefepilze]]

Yeast-One-Hybrid-System - Versionsgeschichte

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