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2017-09-19T15:55:06Z

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{{SEITENTITEL:serielle Analyse der Genexpression}}
Die '''serielle Analyse der Genexpression''' ('''SAGE''', von engl. '''''S'''erial '''A'''nalysis of '''G'''ene '''E'''xpression'') ist eine effektive Methode zur Identifizierung von [[cDNA]]s, durch [[DNA-Sequenzierung|Sequenzierung]] sogenannter ''tags'', die mittels des [[Enzym]]s [[Reverse Transkriptase]] aus [[mRNA]]-Molekülen gewonnen wurden. Die Methode wurde 1995 von Victor Velculescu in den Labors von Keneth W. Kinzler und [[Bert Vogelstein]] an der [[Johns Hopkins University]] entwickelt.<ref>Velculescu, V.E. et al. (1995): ''Serial Analysis of Gene Expression.'' In: ''[[Science]].'' Bd. 270, S. 484–487. PMID 7570003</ref><ref>Anisimov, S.V. (2008): ''Serial Analysis of Gene Expression (SAGE): 13 years of application in research.'' In: ''[[Curr Pharm Biotechnol]].'' 9(5):338-350. [[doi:10.2174/138920108785915148]], PMID 18855686.</ref>

SAGE wurde entwickelt, da die damals vorherrschenden Methoden zur Untersuchung der [[Genexpressionsanalyse|Genexpression]], wie [[Northern Blot]], [[Reverse Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion|RT-PCR]] und [[Expressed Sequence Tag|EST]]-Sequenzierung nur die Untersuchung weniger Gene erlaubten. SAGE beruht darauf, dass eine [[Nukleotidsequenz|Nucleotidsequenz]] von 10 [[Basenpaar|bp]] an einer definierten Stelle der mRNA theoretisch über 1.000.000 (4<sup>10</sup>) Transkripte unterscheidet. Während die ursprüngliche SAGE-Methode lediglich ''Tags'' mit 10–14 bp hervorbrachte, entstehen bei der aktuellen Variante [[SuperSAGE]] Tags mit einer Länge von 26 bis 28 bp. Dies ermöglicht eine vielfach bessere Zuordnung zu bekannten Gensequenzen, erlaubt das Design von spezifischen Primern z. B. für [[RACE-PCR]] und eröffnet neue Analyse-Möglichkeiten, z. B. die gleichzeitige Analyse mehrerer Organismen. Aufgrund der längeren Tags empfiehlt sich SuperSAGE auch zur Analyse von Organismen mit unbekannten Genomen und zur Entdeckung neuer Gene und Transkript-Varianten.

Mit SAGE und seinen Varianten kann das [[Transkriptom]] einer [[Zelle (Biologie)|Zelle]], eines [[Gewebe (Biologie)|Gewebes]] oder eines [[Organ (Biologie)|Organs]] zu einem beliebigen Entwicklungs- oder Krankheitsstadium umfassend analysiert werden.

SAGE und seine Varianten ermöglichen die Analyse einer sehr großen Menge von [[Gen]]en. Ferner kann die Anzahl der genspezifischen mRNA-Moleküle relativ gut bestimmt werden; SAGE ist also eine quantifizierende Methode. Gegenüber dem [[Microarray]]-Verfahren, welches als ''Closed System'' nur bekannte und gespottete Gene detektieren kann, bietet SAGE als ''Open System'' den Vorteil, dass auch noch unbekannte Gene, oder Gene, von denen nicht erwartet wurde, sie vorzufinden, detektiert und ausgewertet werden können.

Ein Nachteil der Methode sind die, im Vergleich zu Microarrays, hohen Kosten. Dieser Nachteil schmilzt aber durch die sinkenden Kosten der [[Next Generation Sequencing]]. Außerdem beschränkt sich der Nachweis auf [[Polyadenylierung|poly-A-Transkripte]] und auf cDNAs die durch die gewählten, häufig schneidenden [[Restriktionsenzym]]e geschnitten werden.

== Einzelnachweise ==
<references />

[[Kategorie:Genexpression]]
[[Kategorie:Biologische Untersuchungsmethode]]

Serielle Analyse der Genexpression - Versionsgeschichte

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