imported>Ernsts: /* Einleitung */ QV

2021-10-02T20:29:46Z

Einleitung: QV

Neue Seite

Ein '''Phagemid''' bzw. '''Phasmid''' ist in der [[Molekularbiologie]] ein [[Plasmid]], welches einen [[Replikationsursprung]] zur einzelsträngigen Replikation von [[Inovirus#Systematik|f1-Phagen]] trägt.

== Eigenschaften ==
Phagemide wurden Anfang der 1980er Jahre entwickelt und dienen als [[Vektor (Gentechnik)|Vektor]] für die [[Desoxyribonukleinsäure|DNA]][[Klonierung|-Klonierung]].<ref name = "Genes">Analysis of Genes and Genomes, John Wiley & Sons, 2004, S. 140, [https://books.google.de/books?id=oEkBS77TuFcC&lpg=PA141&dq=phagemid+f1&hl=de&pg=PA140#v=onepage&q=phagemid%20f1&f=false Google Books]</ref>

Ein Phagemid kann normal als Plasmid vermehrt werden – da es einen entsprechenden Replikationsursprung (''ori'') trägt – und liegt dann doppelsträngig vor. Andererseits kann man das Phagemid aufgrund der ''f1 intergenschen Region, die alle in [[Cis-wirkende Elemente|cis-wirkenden Elemente]]'' für die Replikation (''ori'') und für das ''Packaging'' enthält, auch mit Hilfe eines [[Bakteriophage|Helferphagen]] vermehren.<ref>H. Qi, H. Lu, H. J. Qiu, V. Petrenko, A. Liu: ''Phagemid vectors for phage display: properties, characteristics and construction.'' In: ''J Mol Biol.'' (2012), Band 417, Nr. 3, S. 129–143. {{doi|10.1016/j.jmb.2012.01.038}}. PMID 22310045.</ref> Dazu muss die Bakterienkultur mit einem Helferphagen infiziert werden, denn nur so werden in der [[Wirtszelle]] die nötigen viralen Komponenten für die einzelsträngige [[Replikation]] und Verpackung der Phagemid-DNA in ein Phagenpartikel gebildet. Man verwendet dazu häufig M13-Phagen oder f1-Phagen.<ref name ="Genes" /> Die Helferphagen sind gewöhnlich so gewählt, dass ihre eigene [[DNA]] weniger effektiv in neue Phagen-Partikel eingebaut werden als das Phagemid. Folglich enthalten neue Phagen hauptsächlich das Phagemid und nicht die Helferphagen-DNA. In den Phagen liegt die DNA aufgrund des gewählten ''f1 ori'' einzelsträngig vor.

Um die Phagen zu gewinnen, werden infizierte bakterielle Übernachtkulturen zentrifugiert. Aus dem Bakterienpellet lassen sich die Plasmide isolieren. Die Phagen werden sezerniert und können mittels [[Polyethylenglycol]] (PEG)-Fällung (150 μl 20 % PEG-8000 / 2.5 M NaCl je 1 ml) der Überstände angereichert werden. Die einzelsträngige DNA kann mittels [[Phenol-Chloroform-Extraktion]] und [[DNA-Extraktion|Ethanolfällung]] aus dem Präzipitat gereinigt werden.

Viele heute benutzte Plasmide, wie ''pBluescript II'', enthalten einen ''f1 ori'' und sind deswegen Phagemide. Wie ein Plasmid, kann ein Phagemid dazu benutzt werden, DNA-Fragmente zu [[klonieren]].

== Einzelnachweise ==
<references />

[[Kategorie:Nukleinsäure]]
[[Kategorie:Bakteriologie]]

Phagemid - Versionsgeschichte

imported>Ernsts: /* Einleitung */ QV