https://wiki-de.moshellshocker.dns64.de/index.php?action=history&feed=atom&title=Pfu-PolymerasePfu-Polymerase - Versionsgeschichte2026-06-04T04:18:04ZVersionsgeschichte dieser Seite in Wikipedia (Deutsch) – Lokale KopieMediaWiki 1.43.8https://wiki-de.moshellshocker.dns64.de/index.php?title=Pfu-Polymerase&diff=24631&oldid=previmported>Klug-KLUK: Bindestrich fehlte2020-09-22T15:14:48Z<p>Bindestrich fehlte</p>
<p><b>Neue Seite</b></p><div>{{Infobox Protein<br />
|Name=DNA-Polymerase (''Pyrococcus furiosus'') <br />
|Bild=Pfu Polymerase ribbon diagram.jpg<br />
| PDB = {{PDB2|2jgu}}, {{PDB2|3a2f}}<br />
|Groesse=775 Aminosäuren<br />
|UniProt=P61875<br />
|EC-Nummer=2.7.7.7<br />
|CAS=9012-90-2<br />
|Kategorie=Nukleotidyltransferase<br />
|Reaktionsart=[[Replikation]]<br />
|Substrat=Desoxyribonucleosidtriphosphat + DNA<sub>n</sub><br />
|Produkte= Diphosphat + DNA<sub>n+1</sub><br />
}}<br />
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Die '''''Pfu''-Polymerase''' ist ein [[Enzym]] aus dem [[thermophil]]en [[Archaeen|Archaebakterium]] ''[[Pyrococcus furiosus]]''. Es ist eine [[thermostabile DNA-Polymerase]] mit einer Korrekturlese (engl. ''proof-reading'')-Funktion, die in der [[Biochemie|biochemischen]] Laborarbeit bei der [[Polymerase-Kettenreaktion ]](PCR) verwendet wird.<br />
<br />
Die DNA-Synthese erfolgt wie bei allen [[DNA-Polymerase]]n in [[Nukleinsäure-Nomenklatur|5'→3']]-Richtung. Die Korrekturlesefunktion der ''Pfu''-Polymerase (3'→5' [[Exonuklease]]aktivität) sorgt dafür, dass der neu synthetisierte DNA Strang fortlaufend auf Fehlpaarungen überprüft wird, welche umgehend mit dem Ausbau des fehlerhaften und dem Einbau des korrekt basenpaarenden Nukleotids korrigiert werden. Die ''Pfu'' kommt in der Molekularbiologie hauptsächlich bei denjenigen PCR-Reaktionen zum Einsatz, die sequenzexakte DNA-Amplifikate liefern müssen. Für die übrigen PCR-Operationen ist die wesentlich günstigere und schnellere, dafür weniger akkurate [[Taq-Polymerase|''Taq''-Polymerase]] ausreichend.<br />
Anders als ''Taq''-Polymerasen, erzeugt die ''Pfu'' keine 3′-Überhänge aus [[Adenosin|Adenosylresten]], sondern liefert "glatte Enden" (engl. ''[[blunt ends]]''). Damit ist das Klonieren von ''blunt end'' geschnittener DNA möglich.<br />
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Die ''read-ahead''-Funktion der ''Pfu''-Polymerase ist gekennzeichnet durch das Vorauserkennen von Uracil in DNA-Strängen. Uracil kann durch Desaminierung von Cytosin entstehen und würde eine Basenpaarung mit Adenin zur Folge haben (A:U statt G:C) – sie kommt normalerweise nicht in DNA vor. Die spezifische Funktion der ''Pfu''-Polymerase ist nun, bei Erkennen von Uracil, die DNA-Synthese zu stoppen. Andere Reparaturenzyme übernehmen dann die Korrektur der DNA. Uracil bzw. dUTP führt bei einer Verwendung der Pfu-Polymerase in einer [[Polymerasekettenreaktion]] (PCR) zu einer geminderten Syntheserate, was als {{lang|en|''dUTP-poisoning''}} (''dUTP-Vergiftung'') bezeichnet wird. Dagegen werden [[dUTPasen]] zugesetzt. Alternative thermostabile DNA-Polymerasen, die in der PCR eingesetzt werden, sind beispielsweise die [[Pwo-Polymerase]] (mit ''proof-reading'') und die [[Taq-Polymerase]] (ohne ''proof-reading'').<br />
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== Literatur ==<br />
* M. A. Greagg, M. J. Fogg, G. Panayotou, S. J. Evans, B. A. Connolly, L. H. Pearl: ''A read-ahead function in archaeal DNA polymerases detects promutagenic template-strand uracil.'' In: ''[[Proceedings of the National Academy of Sciences]].'' Band 96, Nummer 16, August 1999, S.&nbsp;9045–9050, {{ISSN|0027-8424}}. PMID 10430892. {{PMC|17729}}.<br />
* G. L. Costa, M. P. Weiner: ''Polishing with T4 or Pfu polymerase increases the efficiency of cloning of PCR fragments.'' In: ''Nucleic acids research.'' Band 22, Nummer 12, Juni 1994, S.&nbsp;2423, {{ISSN|0305-1048}}. PMID 8036174. {{PMC|523705}}.<br />
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[[Kategorie:Nukleotidyltransferase]]<br />
[[Kategorie:DNA-Replikation]]</div>imported>Klug-KLUK