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2024-10-28T11:27:07Z

Eigenschaften

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{{SEITENTITEL:pUC19}}
{{Infobox Nukleinsäure
| Bild = [[Datei:PUC19.svg|200px]]
| Bildlegende = Schematische Plasmidkarte von pUC19 ohne [[Supercoiled DNA|Superspiralisierung]]. Die Gene für die Ampicillinresistenz, den Replikationsursprung sowie der Polylinker (blau) sind eingezeichnet.
| Sequenz =
| Name =
| Freiname =
| Andere Namen =
| GenBank = M77789.2
| CAS = 
| PubChem =
| Entrez =
| PDB = 
| NDB =
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| GeneCards =
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| Wirkstoffgruppe =
| Mechanismus =
| Wikidata =
| Grösse = 2686 [[Basenpaar]]e
| Struktur = [[Klonierungsvektor]], superspiralisierte doppelsträngig zirkuläre DNA
| Restriktion =
| Taxon = [[Bakterien]]
}}
'''pUC19''' gehört wie auch '''pUC18''' zu einer Reihe im Labor von [[Joachim Messing]] gentechnologisch hergestellter [[Vektor (Gentechnik)|Klonierungsvektoren]].<ref name="PMID2985470">C. Yanisch-Perron, J. Vieira, J. Messing: ''Improved M13 phage cloning vectors and host strains: nucleotide sequences of the M13mp18 and pUC19 vectors.'' In: ''Gene.'' Band 33, Nummer 1, 1985, S. 103–119. PMID 2985470.</ref> Diese [[Bakterien|bakteriellen]] [[Plasmid]]e gehören zu den am häufigsten verwendeten Vektoren zur [[Klonierung]] im Bakterium ''[[Escherichia coli]]''. Damit haben sie in der biologischen Forschung und [[Gentechnik]] eine große Bedeutung. Ihr spezieller Vorteil sind die kleine Größe, die Möglichkeit rekombinante Plasmide mittels [[Blau-Weiß-Selektion|Blau-Weiß-Screening]] zu identifizieren und eine besonders hohe Anzahl von Kopien pro Bakterienzelle (sogenannte ''high copy number''-Plasmide), so dass sehr einfach eine große Menge an Plasmid [[Plasmidisolierung|isoliert]] werden kann.

== Eigenschaften ==
Entwicklungsgeschichtlich handelt es sich um Derivate des [[pBR322]]-Plasmids.<ref>J. Vieira, J. Messing: ''The pUC plasmids, an M13mp7-derived system for insertion mutagenesis and sequencing with synthetic universal primers.'' In: ''Gene.'' Band 19, Nummer 3, Oktober 1982, S. 259–268, {{ISSN|0378-1119}}. PMID 6295879.</ref> Die pUC-Plasmide benutzen den modifizierten [[Replikationsursprung|''origin of replication'']] oder kurz ''ori'' des pBR322-Plasmids. Der ''ori'' wurde verkürzt und ihm fehlt die codierende Region für das [[ROM/ROP Protein|ROM/ROP-Protein]]. Durch ''knockout'' von ROP kann die Kopienzahl von ColEI-Plasmiden generell erhöht werden, solange die Kultivierungstemperatur bei >30 °C liegt.<ref name="DOI10.1111/j.1365-2958.1992.tb02206.x">{{Literatur |Autor=Sue Lin-Chao, Wen-Tsuan Chen, Ten-Tsao Wong |Titel=High copy number of the pUC plasmid results from a Rom/Rop-suppressible point mutation in RNA II |Sammelwerk=Molecular Microbiology |Band=6 |Nummer=22 |Datum=1992-11 |ISSN=0950-382X |Seiten=3385–3393 |DOI=10.1111/j.1365-2958.1992.tb02206.x |PMID=1283002}}</ref> Zusätzlich weist der modifizierte ''ori'' eine Punktmutation G → A an Position 112 der RNA II auf. Hieraus resultiert die erhöhte Kopienzahl dieser Vektoren.<ref>C.Helmer-Citterich, M., Anceschi, M. M., Banner, D. W. & Cesareni, G. (1988), ''Control of ColE1 replication: low affinity specific binding of Rop (Rom) to RNAI and RNAII.'' [[The EMBO journal]] 7(2), 557–66.</ref>

Sie sind mit 2686 [[Basenpaare|bp]] relativ klein und ihnen können an speziellen [[Restriktionsenzym]]-Schnittstellen in der der ''[[Multiple Cloning Site]]s'' (MCS, Polylinker), zusätzliche [[DNA]]-Fragmente eingefügt werden. Zur Selektion von pUC-positiven Bakterien nach Einfügung des Plasmids in einen geeigneten Bakterienstamm ([[Transformation (Genetik)|Transformation]]) dient ein in den pUC-Plasmiden vorhandenes [[Ampicillin]]-[[Resistenzgen]] (ampR). Die [[Transkription (Biologie)|Transkription]] von eingefügten Genen in ''E. coli'' kann durch Induktion des eingebauten Promoterfragmentes des [[lac-Operon]]s mit [[IPTG]] gezielt erreicht werden. Der Vektor codiert für das N-terminale Fragment (Aminosäuren 1-5 und 8-60) der [[β-Galactosidase]] (l''acZ'') von ''E. coli''. Die Codons 6-7 wurden durch MCS ersetzt und erlauben so eine Blau-Weiß-Selektion. Die beiden pUC-Plasmide unterscheiden sich lediglich in der inversen Orientierung der MCS.

Es besitzt eine Masse von <math>1{,}74 \cdot 10^{6}\,\mathrm{u}</math>. In seinem natürlichen, [[Supercoiled DNA|superspiralisierten]] Zustand wurde sein [[Streumassenradius|gyroskopischer Radius]] mit 65,6 nm und sein [[hydrodynamischer Radius]] zu 43,6 nm bestimmt.<ref>{{Literatur |Autor=Dominic Störkle, Sabrina Duschner, Nils Heimann, Michael Maskos, Manfred Schmidt |Titel=Complex Formation of DNA with Oppositely Charged Polyelectrolytes of Different Chain Topology: Cylindrical Brushes and Dendrimers |Sammelwerk=Macromolecules |Band=40 |Nummer=22 |Datum=2007-10-05 |Seiten=7998–8006 |Online=http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ma0711689 |Abruf=2016-08-04 |DOI=10.1021/ma0711689}}</ref>

Der Name der Plasmide leitet sich von der [[University of California]] (UC) ab, an der diese Plasmide (p) konstruiert wurden.<ref name="PMID2985470">C. Yanisch-Perron, J. Vieira, J. Messing: ''Improved M13 phage cloning vectors and host strains: nucleotide sequences of the M13mp18 and pUC19 vectors.'' In: ''Gene.'' Band 33, Nummer 1, 1985, S. 103–119. PMID 2985470.</ref>

== Literatur ==
* Y. Wang, S. Sun, L. Yu, S. Hu, W. Fan, F. Leng, J. Ma: ''Optimization and mechanism exploration for Escherichia coli transformed with plasmid pUC19 by the combination with ultrasound treatment and chemical method.'' In: ''Ultrasonics sonochemistry.'' Band 74, Juni 2021, S. 105552, {{DOI|10.1016/j.ultsonch.2021.105552}}, PMID 33887660, {{PMC|8091046}}.
* G. P. Mendes, P. S. Vieira, S. Lanceros-Méndez, L. D. Kluskens, M. Mota: ''Transformation of Escherichia coli JM109 using pUC19 by the Yoshida effect.'' In: ''Journal of microbiological methods.'' Band 115, August 2015, S. 1–5, {{DOI|10.1016/j.mimet.2015.05.012}}, PMID 25966644.

== Weblinks ==
* [http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/viewer.fcgi?db=nuccore&id=20141090 Sequenz des pUC19c]
* {{Webarchiv |url=http://fermentas.com/techinfo/nucleicacids/mappuc1819.htm |text=Informationen und Restriktionskarte von pUC18 und pUC19 |wayback=20090220135623}}

== Quellen ==
<references />

[[Kategorie:Gentechnik]]
[[Kategorie:Synthetische DNA]]
[[Kategorie:Molekularbiologie]]

PUC19 - Versionsgeschichte

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