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2026-01-06T17:13:23Z

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Der '''ONPG-Test''' (Abk. für ''o''-Nitrophenyl-β-D-galactopyranosid-Test) ist ein biochemischer Nachweis für das [[Enzym]] [[β-Galactosidase]]. Die Hydrolyse des synthetischen Substrates [[o-Nitrophenyl-β-D-galactopyranosid|''o''-Nitrophenyl-β-D-galactopyranosid]] (ONPG) durch eine β-Galactosidase wird in der mikrobiologischen [[Diagnostik]] eingesetzt, um [[Bakterien]], zum Beispiel aus der Gattung der ''[[Burkholderia]]'', [[Salmonellen]] und [[Nocardien]], anhand ihrer β-Galactosidase-Aktivität voneinander zu unterscheiden.<ref>R. De Ryck, M. J. Struelens, E. Serruys: ''Rapid biochemical screening for Salmonella, Shigella, Yersinia, and Aeromonas isolates from stool specimens.'' In: ''[[Journal of Clinical Microbiology]].'' Band 32, Nummer 6, Juni 1994, S. 1583–1585, PMID 8077408. {{PMC|264043}}.</ref><ref>M. Flores, E. G. Ford, J. M. Janda: ''Value of the O-nitrophenyl-beta-D-galactopyranoside test to differentiate among the aerobic actinomycetes.'' In: ''Journal of Clinical Microbiology.'' Band 28, Nummer 9, September 1990, S. 2142–2144,. PMID 2121796. {{PMC|268125}}.</ref>

== Grundlagen ==
Einige Bakterien besitzen das Enzym β-Galactosidase, das es ihnen ermöglicht den [[Zweifachzucker]] [[Lactose]] zu verstoffwechseln.
Beim ONPG-Test ersetzt das synthetische [[Galactosid]] ''o''-Nitrophenyl-β-D-galactopyranosid das natürliche Substrat der β-Galactosidase. ONPG wird wie Lactose durch die Galactosid-Permease in die Zelle hineingebracht und durch die β-Galactosidase hydrolysiert. Hierbei entstehen die beiden Reaktionsprodukte [[Galactose]] und [[Nitrophenol|''o''-Nitrophenol]]. Letzteres verursacht eine gelbe Verfärbung der Testlösung bei positiven Proben.

== Durchführung ==
Für jede Probe werden in ein steriles Röhrchen je eine ONPG-Scheibe und etwa 200 µl der sterilen Kochsalzlösung hinzugegeben, so dass sich die ONPG-Scheibe vollständig unter der sterilen Kochsalzlösung befindet. Anschließend werden etwa 1 bis 3 Kolonien des zu untersuchenden Bakteriums von einem festen Nährmedium (Agarplatte/Primärkultur) mit Hilfe eines sterilen Stabes in der sterilen Kochsalzlösung suspendiert. Das Röhrchen mit dem Ansatz inkubiert man dann bei 36 ± 1 °C für maximal 24 Stunden und beobachtet, ob sich eine Farbveränderung der Suspension einstellt.

=== Auswertung ===
Die Ablesung des Testes erfolgt nach etwa 1, 6 und ggf. 24 Stunden. Eine Gelbfärbung der physiologischen Kochsalzlösung zeigt einen positiven ONPG-Test an. Keime, die nach 6 Stunden keine positive Farbveränderung zeigen, sollten bis zu 24 Stunden weiter inkubiert werden. Bleibt die Gelbverfärbung aus, spricht dies für ein negatives Testergebnis.

{| class="wikitable"
! ONPG-positive Bakterien
! ONPG-negative Bakterien
|-
|''[[Burkholderia cepacia]]''
|''[[Burkholderia stabilis]]''
|-
|''[[Burkholderia multivorans]]''
|
|-
|''[[Burkholderia vietnamiensis]]''
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|-
|''[[Burkholderia gladioli]]''
|
|-
|}

Da der ONPG-Test zu [[falsch positiv]]en Ergebnissen führen kann, wird bei der Diagnose von [[Staphylokokken]] gelegentlich alternativ ein Nachweis der β-Galactosidase mit [[X-Gal]] durchgeführt.<ref>H. Tse, E. Chan, C. W. Lam, K. F. Leung, P. Chow, K. C. Lee, K. H. Sze, S. K. Cheung, M. K. Tse, P. L. Ho, S. P. Leung, S. K. Lau, P. C. Woo, K. Y. Yuen: ''Production of 2-aminophenoxazin-3-one by Staphylococcus aureus causes false-positive results in ?-galactosidase assays.'' In: ''Journal of Clinical Microbiology.'' Band 50, Nummer 11, November 2012, S. 3780–3782, {{DOI|10.1128/JCM.02299-12}}. PMID 22972831. {{PMC|3486264}}.</ref>

== Einzelnachweise ==
<references />

{{SORTIERUNG:Onpg-Test}}
[[Kategorie:Mikrobiologisches Testverfahren]]
[[Kategorie:Biochemische Nachweisreaktion]]

ONPG-Test - Versionsgeschichte

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