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{{Infobox Chemikalie
| Strukturformel = [[Datei:Nile BlueMe.svg|200px|Strukturformel von Nilblau]]
| Andere Namen = * 5-Amino-9-(diethylamino)benzo[''a'']phenoxazin-7-ium
* [[Color Index|C.I.]] Basic Blue 12
* C.I. 51180
| Summenformel = C20H20N3O+
| CAS = * {{CASRN|2381-85-3|Q27123279}} ([[Hydrochlorid]])
* {{CASRN|3625-57-8}} ([[Hydrogensulfat]])
* {{CASRN|53340-16-2|Q27123280}} (Perchlorat)
| EG-Nummer = 222-832-5
| ECHA-ID = 100.020.757
| PubChem = 422690
| ChemSpider = 374117
| Beschreibung = * dunkelgrüner Feststoff (Chlorid)<ref name=roempp>{{RömppOnline|ID=RD-14-01223|Name=Nilblau A|Abruf=2014-06-01}}</ref>
* dunkelgrünes bis blau oder schwarzes Pulver (Sulfat)<ref name=roempp/>
| Molare Masse = 318,39 g·[[mol]]−1
| Aggregat = fest
| Dichte =
| Schmelzpunkt = >300 [[Grad Celsius|°C]]<ref name="Merck">{{Merck|115946|Name=|Abruf=2008-06-03}}</ref>
| Siedepunkt =
| Dampfdruck =
| Löslichkeit = löslich in Wasser (50 g·l−1 bei 25 °C)<ref name="Merck"/>
| Quelle GHS-Kz = <ref name="Sigma">{{Sigma-Aldrich|SIGMA|N5632|Name=Nile Blue A|Abruf=2017-05-09}}</ref>
| GHS-Piktogramme = Sulfat {{GHS-Piktogramme|-}}
| GHS-Signalwort =
| H = {{H-Sätze|-}}
| EUH = {{EUH-Sätze|-}}
| P = {{P-Sätze|-}}
| Quelle P =
| MAK =
}}

'''Nilblau''', oft auch als '''Nilblau A''' (meist nur das [[Hydrogensulfat]]) bezeichnet, ist ein [[Fluoreszenz|fluoreszierender]] [[Phenoxazin]]-[[Farbstoff]].

Als [[Indikator (Chemie)#pH-Indikatoren|Indikatorfarbstoff]] zeigt Nilblau im sauren Milieu eine blaue Farbe und ist im Alkalischen rot.

Durch Kochen einer Lösung von Nilblau mit [[Schwefelsäure]] entsteht der Farbstoff [[Nilrot]].

== Eigenschaften ==
[[Datei:Nile blue 04.jpg|mini|links|Nilblauhydrochlorid in Wasser in unterschiedlicher Konzentration. V. l. n. r.: 1000 [[Parts per million|ppm]], 100 ppm, 10 ppm, 1 ppm, 100 ppb.]]
[[Datei:Nile blue 05.jpg|mini|links|Nilblau in Wasser bei verschiedenen pH-Werten. V. l. n. r.: pH 0, pH 4, pH 7, pH 10, pH 14.]]
[[Datei:Nile blue 02.jpg|mini|links|Nilblau in Wasser (untere Phase) und Ethylacetat (obere Phase) bei Tageslicht. V. l. n. r.: pH 0, pH 4, pH 7, pH 10, pH 14]]
[[Datei:Nile blue 03.jpg|mini|links|Nilblau in Wasser (untere Phase) und Ethylacetat (obere Phase) im UV-Licht (366 nm). V. l. n. r.: pH 0, pH 4, pH 7, pH 10, pH 14]]
[[Datei:Nile blue 06.jpg|mini|links|Nilblau (freie Base) bei Tageslicht (obere Reihe) und UV-Licht (366 nm, untere Reihe) in verschiedenen Lösungsmitteln. V. l. n. r.: 1. [[Methanol]], 2. [[Ethanol]], 3. [[MTBE|''tert''-Butylmethylether]], 4. [[Cyclohexan]], 5. [[N-Hexan|''n''-Hexan]], 6. [[Aceton]], 7. [[Tetrahydrofuran]], 8. [[Ethylacetat]], 9. [[Dimethylformamid]], 10. [[Acetonitril]], 11. [[Toluol]], 12. [[Chloroform]]]]

Nilblau ist ein [[Fluoreszenzfarbstoff]]. Die [[Fluoreszenz]] zeigt besonders in [[apolar]]en [[Lösungsmittel]]n eine hohe [[Quantenausbeute]]:<ref name="tetrahedron">Jiney Jose and Kevin Burgess: ''Benzophenoxazine-based fluorescent dyes for labeling biomolecules'', in ''[[Tetrahedron]]'', '''2006''', ''62'', S. 11021–11037; {{DOI|10.1016/j.tet.2006.08.056}}.</ref>

Die Absorption und Emissionsmaxima von Nilblau sind stark abhängig vom [[pH-Wert]] und dem verwendeten Lösungsmittel ([[Solvatochromie]]).

{| class="wikitable centered" style="text-align:center"
|+ Die Absorptions- und Emissionsmaxima von Nilblau in Abhängigkeit vom verwendeten Lösungsmittel<ref name=tetrahedron/>
|- class="hintergrundfarbe6"
! colspan="2" | Lösungsmittel
! Absorption λmax (nm)
! Emission λmax (nm)
|-
| colspan="2" style="text-align:left" | [[Toluol]]
| 493
| 574
|-
| colspan="2" style="text-align:left" | [[Aceton]]
| 499
| 596
|-
| colspan="2" style="text-align:left" | [[Dimethylformamid]]
| 504
| 598
|-
| colspan="2" style="text-align:left" | [[Chloroform]]
| 624
| 647
|-
| colspan="2" style="text-align:left" | [[1-Butanol]]
| 627
| 664
|-
| colspan="2" style="text-align:left" | [[2-Propanol]]
| 627
| 665
|-
| colspan="2" style="text-align:left" | [[Ethanol]]
| 628
| 667
|-
| colspan="2" style="text-align:left" | [[Methanol]]
| 626
| 668
|-
| colspan="2" style="text-align:left" | [[Wasser]]
| 635
| 674
|-
| style="border-right:none; text-align:left" | 0,1 N [[Salzsäure]]
| style="border-left:none;" | (pH = {{0}}1,0)
| 457
| 556
|-
| style="border-right:none; text-align:left" | 0,1 N [[Natronlauge]]
| style="border-left:none;" | (pH = 13,0)
| 522
| 668
|-
| style="border-right:none; text-align:left" | [[Ammoniakwasser]]
| style="border-left:none;" | (pH = 11,0)
| 524
| 668
|}

Die Fluoreszenzdauer von Nilblau wurde in Ethanol mit 1,42 ns bestimmt. Dies ist kürzer als der entsprechende Wert von Nilrot mit 3,65 ns. Die Fluoreszenzdauer ist relativ invariant gegenüber Verdünnungen im Bereich von 10−3 – 10−8 mol·dm−3.<ref name=tetrahedron/>

== Die Nilblau-Färbung ==
Nilblau wird zur [[Histologie|histologischen]] Anfärbung biologischer Präparate verwendet. Dabei gelingt die Unterscheidung zwischen neutralen [[Lipid]]en ([[Triglyceride]], [[Cholesterinester]], [[Steroide]]), die rosa angefärbt werden, und sauren ([[Fettsäuren]], [[Chromolipide]], [[Phospholipide]]), die blau angefärbt werden.<ref>[http://www.tk.de/rochelexikon/ro25000/r26881.000.html Roche Lexikon, abgerufen am 25. Juni 2007].</ref>

Die Nilblau-Färbung nach Kleeberg benötigt folgende Chemikalien:
* Nilblau A
* 1%ige [[Essigsäure]]
* [[Glycerin]] bzw. Glyceringelatine

=== Der Arbeitsablauf ===
Das Präparat wird in [[Formaldehyd|Formol]] fixiert. Daraus werden [[Mikrotom#Gefriermikrotom|Gefrierschnitte]] oder Zupfpräparate hergestellt. Anschließend werden sie für 20 Minuten in die Nilblau-Lösung getaucht und danach mit Wasser abgespült. Zur besseren Differenzierung wird in 1%ige Essigsäure für 10–20 Minuten eingetaucht, bis die Farbtöne rein sind. Dies kann u. U. schon nach 1–2 Minuten der Fall sein. Dann wird in mehrfach gewechseltem Wasser gründlich gewässert (ein bis zwei Stunden). Danach kann das angefärbte Präparat auf einen Objektträger gezogen und der Wasserüberschuss abgesaugt werden. Der Einschluss des Präparates kann in Glycerin oder lauwarmer Glyceringelatine erfolgen.

=== Das Ergebnis ===
Ungesättigte [[Glycerid]]e sind rosa, Kerne und [[Elastica]] dunkelblau, [[Fettsäuren]] und zahlreiche Fettsubstanzen und Fettgemische blau bis violett gefärbt.<ref>[[Benno Romeis]], ''Mikroskopische Technik'', 15. Aufl., R. Oldenbourg Verlag, München 1948.</ref>

==== Beispiel: Nachweis von Poly-β-hydroxybutyrat-Granula (PHB) ====
Die [[Polyhydroxybuttersäure|PHB-Granula]] in den Zellen von ''[[Pseudomonas]] solanacearum'' können durch Anfärbung mit Nilblau A sichtbar gemacht werden. Die PHB-Granula der gefärbten Ausstriche zeigen unter einem [[Fluoreszenzmikroskop|Epifluoreszenzmikroskop]] bei 450 nm Anregungswellenlänge unter Ölimmersion, bei 1000-facher Vergrößerung eine kräftige orangefarbene Fluoreszenz.<ref>{{CELEX|31997D0647|''97/647/EG: Entscheidung der EU-Kommission vom 9. September 1997 über ein vorläufiges Versuchsprogramm für Diagnose, Nachweis und Identifizierung von Pseudomonas solanacearum (Smith) Smith in Kartoffeln'', abgerufen am 27. Juni 2007}}.</ref>

== Nilblau in der Onkologie ==
[[Derivat (Chemie)|Derivate]] des Nilblau sind potentielle [[Photosensibilisator (Chemie)|Photosensibilisatoren]] in der [[Photodynamische Therapie|photodynamischen Therapie]] (PDT) von [[Krebs (Medizin)|malignen Tumoren]]. Diese Farbstoffe werden durch Farbstoffaggregation in den Tumorzellen, speziell in den [[Biomembran|Lipidmembranen]] und/oder sequestriert in den subzellularen [[Organellen]], stark angereichert.<ref>C.W. Lin, J.R. Shulok, S.D. Kirley, L. Cincotta, J.W. Foley: ''Lysosomal localization and mechanism of uptake of Nile blue photosensitizers in tumor cells'', in: ''[[Cancer Research]]'', '''1991''', ''51'', S. 2710–2719; PMID 2021950.</ref>

Mit dem Nilblau-Derivat ''N''-Ethyl-Nilblau (EtNBA) konnte in Tierversuchen zwischen ''normalem'' und ''prämalignem'' Gewebe mittels [[Fluoreszenztomographie|Fluoreszenzbildgebung]] beziehungsweise Fluoreszenzspektroskopie unterschieden werden. EtNBA zeigt dabei keine [[phototoxisch]]en Effekte.<ref>H.J. van Staveren: ''Fluorescence imaging and spectroscopy of ethyl nile blue A in animal models of (pre)malignancies'', in: ''[[Photochemistry and photobiology]]'', '''2001''', ''73'', S. 32–38; PMID 11202363.</ref>

==Herstellung==
Nilblau und verwandte Napthoxaziniumfarbstoffe können auf verschiedenen Wegen hergestellt werden.
* Säurekatalysierte Kondensation von 5-(Dialkylamino)-2-nitrosophenolen mit 1-Naphthylamin
* 3-(Dialkylamino)phenolen mit ''N''-alkylierten 4-Nitroso-1-naphthylaminen
* ''N'',''N''-Dialkyl-1,4-phenylenediaminen mit 4-(Dialkylamino)-1,2-naphthoquinonen
Alternativ kann das Produkt einer säurekatalysierten Kondensation von 4-Nitroso-''N'',''N''-dialkylanilin mit 2-Naphthol in Gegenwart von Aminen oxidiert werden und so ein zweiter Aminsubstituent in 5-Position eingeführt werden.<ref>Andreas Kanitz, Horst Hartmann: ''Preparation and Characterization of Bridged Naphthoxazinium Salts.'' In: ''European Journal of Organic Chemistry.'' 1999, S. 923–930, {{DOI|10.1002/(SICI)1099-0690(199904)1999:4<923::AID-EJOC923>3.0.CO;2-N}}.</ref> Das folgende Formelschema zeigt die erste Synthesemöglichkeit

[[Image:Nile Blue perchlorate synthesis.png|800px|center|Nile Blue perchlorate synthesis]]

== Einzelnachweise ==
<references/>

== Literatur ==
* F.J. Green: ''The Sigma-Aldrich Handbook of Stains, Dyes and Indicators'', Aldrich Chemical Company, Milwaukee, 1990.
* J. Rao, A. Dragulescu-Andrasi, H. Yao: ''Fluorescence imaging in vivo: recent advances'', in: ''[[Current Opinion in Biotechnology]]'', '''2007''', ''18'', S. 17–25; PMID 17234399.

[[Kategorie:Iminocyclohexadien]]
[[Kategorie:Benzoxazin]]
[[Kategorie:N-Alkylaminobenzol]]
[[Kategorie:Anelliertes Benzol]]
[[Kategorie:Fluoreszenzfarbstoff]]
[[Kategorie:Phenoxazinfarbstoff]]
[[Kategorie:Indikator (Chemie)]]

Nilblau - Versionsgeschichte

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