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<p>Unicode-Zeichen entfernt/ersetzt</p> <p><b>Neue Seite</b></p><div>Als &#039;&#039;&#039;Klenow-Fragment&#039;&#039;&#039;, auch Klenow-Enzym, wird das größere der beiden [[Protein]]fragmente der [[DNA-Polymerase I]] aus &#039;&#039;[[Escherichia coli]]&#039;&#039; bezeichnet, die nach [[enzym]]atischer Spaltung mit [[Subtilisin]] entstehen. Es besitzt noch die 5&#039;→3&#039; [[Polymerase]]-Aktivität und die 3&#039;→5&#039; [[Exonuklease]]-Aktivität (&#039;&#039;proof reading&#039;&#039;), jedoch nicht mehr die 5&#039;→3&#039; Exonuklease-Aktivität der DNA-Polymerase I. Das Proteinfragment wurde erstmals 1970 von dem dänischen [[Biochemie|Biochemiker]] Hans Klenow beschrieben.&lt;ref&gt;Klenow, H. &amp; Henningsen, I. (1970): &#039;&#039;Selective elimination of the exonuclease activity of the deoxyribonucleic acid polymerase from Escherichia coli B by limited proteolysis.&#039;&#039; In: &#039;&#039;Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.&#039;&#039; 65(1):168-175, PMID 4905667, {{PMC|286206}}.&lt;/ref&gt;<br /> <br /> == Verwendung ==<br /> Das Klenow-Fragment wird in der [[Molekularbiologie]] für verschiedene Zwecke verwendet:<br /> * Synthese von doppelsträngiger DNA (Polymerasefunktion)<br /> * das Klenow-Fragment war das ursprüngliche Enzym&lt;ref&gt;Saiki, R.K. &#039;&#039;et al.&#039;&#039; (1985): &#039;&#039;Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia.&#039;&#039; In: &#039;&#039;Science.&#039;&#039; 230(4732):1350–1354, PMID 2999980.&lt;/ref&gt;, welches für die Amplifizierung von DNA mittels [[Polymerase-Kettenreaktion|PCR]] verwendet wurde, bevor es durch [[thermostabile DNA-Polymerase]]n, wie die [[Taq-Polymerase]],&lt;ref&gt;Saiki, R.K. &#039;&#039;et al.&#039;&#039; (1988): &#039;&#039;Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase.&#039;&#039; In: &#039;&#039;Science.&#039;&#039; 239(4839):487-491, PMID 2448875.&lt;/ref&gt; ersetzt wurde. Das Klenow-Enzym ist nicht thermostabil und musste in jedem Zyklus erneut hinzugegeben werden.<br /> * Auffüllen von 5&#039;-überstehenden, einzelsträngigen DNA-Sequenzen nach [[Restriktionsenzym|Restriktionen]] (Polymerasefunktion)<br /> * Abbau von 3&#039;-überstehenden, einzelsträngigen DNA-Sequenzen nach Restriktionen (Exonukleasefunktion) <br /> Diese Aktivitäten dienen nach dem Schneiden von DNA mit [[Restriktionsenzym]]en zur Herstellung von sogenannten &#039;&#039;[[blunt ends]]&#039;&#039;, die mittels [[DNA-Ligase|T4-Ligase]] verbunden werden können (z.&amp;nbsp;B. bei [[Klonierung]]en). Neben dem DNA-Template werden die 4 Nucleotidtriphosphate dGTP, dATP, dTTP und dCTP in der Magnesium-abhängigen Reaktion angeboten. Die Polymeraseaktivität dient auch der Markierung (engl. &#039;&#039;end labeling&#039;&#039;) von DNA-Fragmenten mit radioaktivem [[Phosphor#Isotope|Phosphorisotop]] &lt;sup&gt;32&lt;/sup&gt;P durch Ersatz eines dNTPs, beispielsweise dATP durch α-&lt;sup&gt;32&lt;/sup&gt;P-ATP und als Enzym beim &#039;&#039;[[Random Priming]]&#039;&#039;. Weitere Anwendungen sind die [[DNA-Sequenzierung]] mit der Didesoxymethode nach [[Frederick Sanger|Sanger]] und die Zweitstrangsynthese bei der Klonierung von [[cDNA]]s. <br /> <br /> == Einzelnachweise ==<br /> &lt;references /&gt;<br /> <br /> [[Kategorie:Hydrolase]]<br /> [[Kategorie:Molekularbiologie]]<br /> [[Kategorie:Gentechnik]]</div>

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