46.114.35.75 am 28. Januar 2021 um 20:35 Uhr

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Als '''Blotting''' oder '''Blotten''' bezeichnet man in der [[Molekularbiologie]] ein Verfahren zum Transfer von Molekülen wie [[Desoxyribonukleinsäure|DNA]], [[Ribonukleinsäure|RNA]] oder [[Protein]]e auf eine Membran. Der Name leitet sich aus dem englischen „to blot“ (klecksen, beflecken, mit Löschpapier abtupfen) ab, was auf die Vorgehensweise anspielt. Das Lehrbuch ''Der Experimentator'' beschreibt das Blotting als den „Versuch, etwas, das man zuvor in einem Gel elektrophoretisch getrennt hat, dauerhaft auf einer Membran zu fixieren“.<ref name="Mülhardt">Cornel Mülhardt: ''[https://books.google.de/books?id=vW07qhAzdfcC&pg=PT87&lpg=PT87&dq=Der+Experimentator,+Ein+Blot+ist+der+Versuch&source=bl&ots=nB5Ensb5uz&sig=UiQecy8ahfnV1Bvka34z4wDou7A&hl=de&ei=-4thS_XLK5DWmwODp-zHDA&sa=X&oi=book_result&ct=result#v=onepage&q=&f=false Der Experimentator. Molekularbiologie / Genomics.]'' Spektrum, Akademischer Verlag, Heidelberg 2009, ISBN 978-3-8274-2036-7, S. 75.</ref>

[[Edwin Southern]] führte 1975 die Blotting-Technik für DNA ein, die als [[Southern Blot]] bezeichnet wird.<ref>Edwin M. Southern: ''Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electrophoresis.'' In: ''Journal of Molecular Biology.'' Bd. 98, Nr. 3, November 1975, {{ISSN|0022-2836}}, S. 503–517, PMID 1195397, {{doi|10.1016/S0022-2836(75)80083-0}}.</ref> In Anlehnung an seinen Namen wurden die später von [[George R. Stark]] entwickelten Blotting-Techniken für RNA als [[Northern Blot]] und für Proteine als [[Western Blot]] bezeichnet. Darüber hinaus existieren [[Southwestern Blot|Southwestern-Blotting]] für DNA-Protein-, [[Northwestern Blot|Northwestern-Blotting]] für RNA-Protein- und [[Far-Western-Blot]]ting für Protein-Protein-Interaktionsanalysen.

== Gemeinsames Prinzip ==
Das zu untersuchende Material (DNA, RNA oder Proteine) wird mittels [[Gelelektrophorese]] getrennt. Anschließend wird es auf eine ''Blotmembran'' (ein [[Filter (Fluidtechnik)|Filter]], beispielsweise aus [[Nitrozellulose]], [[Polyamide#Nylon|Nylon]], [[PVDF]] oder [[Glasfaser]]) übertragen (das eigentliche Blotting) und dort irreversibel fixiert. Im nächsten Schritt wird meist ein [[Antikörper]] oder eine [[radioaktiv]] markierte Sonde (eine [[Gensonde]] bei Nukleinsäuren, eine [[Immunfärbung]] bei Proteinen) hinzugefügt. Gensonden bleiben nur an der gesuchten [[Nukleotidsequenz|Sequenz]] haften ([[Hybridisierung (Molekularbiologie)|Hybridisierung]]). Die ungebundenen Sonden werden abgewaschen und der Filter auf einen [[Röntgenfilm]] gelegt, der durch die [[Chemolumineszenz]] oder [[Autoradiographie]] belichtet wird und so die Ergebnisse der [[Elektrophorese]] anzeigt.

== Literatur ==
* [[Thomas Maniatis]], Edward F. Fritsch, [[Joseph Sambrook]]: ''Molecular Cloning. A Laboratory Manual.'' Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbour NY 1982, ISBN 0-87969-136-0.

== Einzelnachweise ==
<references/>

[[Kategorie:Elektrophorese]]

Blotting - Versionsgeschichte

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