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[[Datei:Autoradiography of a brain slice from an embryonal rat - PMID19190758 PLoS 0004371.png|mini|Autoradiogramm eines Schnitts durch das Gehirn eines Rattenembryos. Die Markierung erfolgte mit Oligonukleotid-Sequenzen, die mit <sup>35</sup>[[Schwefel|S]]-dATP ([[Desoxyadenosintriphosphat]]) konjugiert waren und an GAD67 ([[Glutamatdecarboxylase]] 67) binden. Die Bereiche mit hoher [[Radioaktivität]] (hohe Markerkonzentration) sind schwarz. Dies ist insbesondere in der [[Subventrikuläre Zone|subventrikulären Zone]] (SVZ) der Fall. Der schwarze Maßstabsbalken entspricht einer Länge von 2&nbsp;mm.]]<br />
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'''Autoradiographie''' oder '''Radiographie''' (häufige Abkürzung AURA) bezeichnet die Sichtbarmachung einer chemischen Komponente durch [[Radionuklid|radioaktive Nuklide]],<ref>E. G. Solon, A. Schweitzer, M. Stoeckli, B. Prideaux: ''Autoradiography, MALDI-MS, and SIMS-MS imaging in pharmaceutical discovery and development.'' In: ''[[The AAPS Journal]].'' Band 12, Nummer 1, März 2010, S.&nbsp;11–26, {{ISSN|1550-7416}}. {{DOI|10.1208/s12248-009-9158-4}}. PMID 19921438. {{PMC|2811645}}.</ref> ursprünglich durch Schwärzung eines fotografischen Filmes, inzwischen vermehrt mit Hilfe eines [[Strahlungsdetektor]]s. Die dabei erhaltene Aufnahme wird '''Autoradiogramm''' genannt.<br />
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== Anwendungen ==<br />
Die Autoradiographie war über drei Jahrzehnte hin ein integraler Bestandteil der [[DNA-Sequenzierung]] nach [[Frederick Sanger]]. Ein Protagonist war der Pathologe [[Elmar Stöcker]]. 48 seiner Publikationen stützen sich auf die Autoradiographie. Seit den letzten Jahren des 20. Jahrhunderts werden allerdings vermehrt fluoreszierende anstelle von radioaktiv markierten DNA-Nukleotiden zur Sequenzanalyse benutzt.<br />
Autoradiographie findet weiterhin Verwendung bei der Produktion von rekombinanten Proteinen, Analyse von enzymatischen Reaktionen, oder Identifizierung von Enzym-Substraten.<ref>R. Westermeier, R. Marouga: ''Protein detection methods in proteomics research.'' In: ''[[Bioscience Reports]].'' Band 25, Nummer 1–2, 2005 Feb-Apr, S.&nbsp;19–32, {{ISSN|0144-8463}}. {{DOI|10.1007/s10540-005-2845-1}}. PMID 16222417.</ref> Außerdem wird sie in der [[Pharmakokinetik]] angewendet,<ref>D. P. Holschneider, J. M. Maarek: ''Brain maps on the go: functional imaging during motor challenge in animals.'' In: ''Methods (San Diego, Calif.).'' Band 45, Nummer 4, August 2008, S.&nbsp;255–261, {{ISSN|1095-9130}}. {{DOI|10.1016/j.ymeth.2008.04.006}}. PMID 18554522. {{PMC|2561174}}.</ref> um z. B. [[Liberation Absorption Distribution Metabolism Excretion|Liberation-Absorption-Distribution-Metabolism-Excretion]]-Studien (LADME) zu erstellen. Die Verbindung von Autoradiographie und [[Neutronenaktivierung]] wird als [[Neutronenautoradiografie]] eingesetzt, um lokale elementare Zusammensetzungen bei Gemälden zu untersuchen.<br />
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== Durchführung ==<br />
Für die Autoradiographie müssen in die zu analysierenden Moleküle radioaktive Nuklide eingeschleust werden. Aufgrund des häufigen Vorkommens der entsprechenden stabilen Isotope in Biomolekülen und ihrer relativ geringen Gefährlichkeit werden oft die Radionuklide <sup>14</sup>C ([[Kohlenstoff]]), <sup>35</sup>S ([[Schwefel]]), <sup>32</sup>P ([[Phosphor]]) und <sup>3</sup>H ([[Tritium]]) eingesetzt.<br />
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''1. Beispiel – Markierung [[Rekombinantes Protein|rekombinanter Proteine]]''<br />
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Ein mit einem [[Plasmid|Expressionsplasmid]] transformierter Bakterienstamm wird mit einem Nährmedium versetzt, das die radioaktiv markierte [[Aminosäure]] <sup>35</sup>S-[[Methionin]] enthält. <sup>35</sup>S-Methionin wird in das rekombinante Protein, das auf dem [[Plasmid]] [[Genetischer Code|kodiert]] ist, eingebaut. Ein Bakterienextrakt wird per [[SDS-PAGE]] aufgetrennt, das [[SDS-PAGE|Gel]] wird getrocknet, und ein Film wird aufgelegt. Nach „Belichtung“ des Films durch die vom Schwefel-35 ausgehenden [[Betastrahlen]] ist auf dem entwickelten Film die Position des rekombinanten Proteins sichtbar.<br />
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''2. Beispiel – Analyse von Enzymaktivität''<br />
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Eine [[ATPasen|ATPase]] – also ein [[Enzym]], das [[Adenosintriphosphat|ATP]] spaltet – wird mit radioaktiv markiertem <sup>32</sup>P-ATP inkubiert. Die Mischung wird nach unterschiedlichen Zeiten durch [[Dünnschichtchromatografie]] aufgetrennt, die Chromatographieplatte wird getrocknet und auf Film gelegt. Die Schwärzung des Films durch <sup>32</sup>P-[[Phosphat]] spiegelt die Aktivität des Enzyms wider.<br />
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== Literatur ==<br />
* A. Scholl, E. Stöcker, H. Finger und D. Krammenschneider: ''Morphologische Verlaufsuntersuchungen an der Mäusemilz nach Cyclophosphamidapplikation. Morphometrische Methoden im Vergleich mit autoradiographischen Verfahren''. Verh. Dtsch. Ges. Path. 61 (1977), S. 377.<br />
* P.-H. Bippus, E. Stöcker und H. Heyn: ''Zelluläre <sup>3</sup>H-TdR-Aktivitätsmessung und Topik regenerierender Zellen in Niere und Leber nach sukzessiv erfolgter Uninephrektomie und Zweidrittelteilhepatektomie (Autoradiographie)''. Verh. Dtsch. Ges. Path. 61 (1977), S. 436.<br />
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== Einzelnachweise ==<br />
<references /><br />
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{{Normdaten|TYP=s|GND=4134999-4}}<br />
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[[Kategorie:Strahlenbiologie]]<br />
[[Kategorie:Biochemische Methode]]<br />
[[Kategorie:Genetik]]</div>imported>Aka