https://wiki-de.moshellshocker.dns64.de/index.php?action=history&feed=atom&title=32P-Postlabeling32P-Postlabeling - Versionsgeschichte2026-05-28T10:03:54ZVersionsgeschichte dieser Seite in Wikipedia (Deutsch) – Lokale KopieMediaWiki 1.43.8https://wiki-de.moshellshocker.dns64.de/index.php?title=32P-Postlabeling&diff=1548666&oldid=previmported>Leyo: format2023-01-04T21:00:56Z<p>format</p>
<p><b>Neue Seite</b></p><div>Beim '''<sup>32</sup>P-Postlabeling''' handelt es sich um eine Methode zum Nachweis von [[DNA-Addukt]]en.<br />
<br />
== Einzelschritt ==<br />
=== Enzymatische Hydrolyse ===<br />
Im ersten Schritt erfolgt eine enzymatische [[Hydrolyse]] der [[DNA]] mittels [[Nuklease]] und [[Phosphodiesterase]]. Als Produkte entstehen 3'-Monophosphate. Enthielt die DNA DNA-Addukte, so entsteht ein Gemisch aus Addukten und adduktfreien [[Nukleotide]]n.<br />
<br />
=== Adduktanreicherung ===<br />
Die Anreicherung ist fakultativ, erhöht jedoch die Empfindlichkeit. In einem zweiten Schritt spaltet eine selektive P1-Nuklease das 3'-Phosphat von den normalen Nukleotiden ab. Die durch Addukte modifizierten Nukleotide sind abbauresistent, so dass es zu einer Anreicherung kommt.<br />
<br />
Alternativ ist es auch möglich, mittels [[n-Butanol|''n''-Butanol]]-Extraktion die Addukte mit hydrophober Struktur zu extrahieren und somit anzureichern.<br />
<br />
=== Phosphorylierung ===<br />
Zur Markierung der Nukleotide wird durch T4-Polynukleotid-Kinase ein radioaktiver Phosphatrest von [γ-<sup>32</sup>P]-[[Adenosintriphosphat|ATP]] auf die Nukleotide im Ansatz übertragen. Es entstehen Desoxyribonukleosid-3'-[5'-<sup>32</sup>P]-bisphosphate.<br />
<br />
=== Trennung und Nachweis ===<br />
Mittels mehrdimensionaler [[Dünnschichtchromatographie]] und Szintillation bzw. mittels [[Hochleistungsflüssigkeitschromatographie]] (HPLC) kann nun der Nachweis erfolgen. Die Nachweisgrenze liegt bei 1 Addukt auf 10<sup>10</sup> N.<br />
<br />
== Literatur ==<br />
* Ramesh C. Gupta: ''Enhanced Sensitivity of 32P-Postlabeling Analysis of Aromatic Carcinogen: DNA Adducts''. in: ''[[Cancer Research]]'', 45, 5656–5662, November 1985, ([http://cancerres.aacrjournals.org/cgi/reprint/45/11_Part_2/5656.pdf PDF]).<br />
* M. V. Reddy und K. Randerath: ''Nuclease P1-mediated enhancement of sensitivity of 32P-postlabeling test for structurally diverse DNA adducts.'' in: [[Carcinogenesis]] 7(1986) 1543–1551. PMID 3017601<br />
* D. H. Phillips: ''Detection of DNA modifications by the 32P-postlabelling assay.'' in: Mut. Res., 378(1997) 1–12. PMID 9288880<br />
* K. Randerath und E. Randerath: ''P-32 postlabeling methods for DNA adduct detection - overview and critical-evaluation.'' in: Drug Metab. Rev., 26(1994) 67–85. PMID 8082582<br />
* K. Randerath, M. V. Reddy und R. C. Gupta: ''32P-labelling test for DNA damage.'' in: [[PNAS]], 78(1981) 6126–6129. PMID 7031643<br />
* A. Weston: ''Physical methods for the detection of carcinogen-DNA adducts in humans.'' in: Mut. Res., 288(1993) 19–29. PMID 7686262<br />
* A. Weston und M. C. Poirier in H. A. Milman und [[Elizabeth K. Weisburger|E. K. Weisburger]] (Editors): „Handbook of Carcinogen Testing“.<br />
<br />
{{SORTIERUNG:#::32P-Postlabeling}}<br />
[[Kategorie:Genetik]]<br />
[[Kategorie:Nukleinsäure-Methode]]</div>imported>Leyo