Quelltext der Seite Tac-Promoter

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Der '''''tac''-Promoter''' (''tac-Promotor'') ist ein synthetisch erzeugtes [[Desoxyribonukleinsäure|DNA]]-Fragment, das in der [[Molekularbiologie]], [[Biochemie]], und [[Biotechnologie]] als Werkzeug bei der Proteinherstellung eingesetzt wird. Das DNA-Konstrukt dient zur Erhöhung des [[Genexpression]]slevels in Zellen des Bakteriums ''[[Escherichia coli]]'' und somit zur [[Proteinüberexpression|Überexpression]] [[rekombinantes Protein|rekombinanter Proteine]]. Die Bezeichnung ''tac'' setzt sich zusammen aus [[trp-Operon|''trp'']] und [[lac-Operon|''lac'']], den Namen der [[Operon]]s die zur Herstellung des ''tac''-Konstrukts verwendet wurden.

Bakterielle [[Promotor (Genetik)|Promotor]]en bestehen aus zwei Teilen, der sogenannten ''−35-Region'' und der ''−10-Region'' – auch [[Pribnow-Box]] genannt. An diese beiden Regionen bindet der [[Sigma-Faktor]] der [[RNA-Polymerase]], die dann die [[Transkription (Biologie)|Transkription]] des dahinterliegenden [[Gen]]s einleitet.

Es gibt starke und schwache Promotoren, das bedeutet, der Sigma-Faktor bindet an manche Promotor besser (folglich wird an diesen mehr [[mRNA]] gebildet), an manche schwächer (hier ist die mRNA-Menge geringer). Aus dem Vergleich der [[DNA-Sequenz]]en einzelner Promotoren lassen sich sogenannte ''[[Konsensussequenz]]en'' für starke und schwache Promotoren ableiten. Bei Proteinüberexpressionsexperimenten ist man an einer möglichst großen Menge rekombinanten Proteins interessiert, folglich werden hier starke Promotoren eingesetzt.

Ein Beispiel für einen starken Promotor aus ''Escherichia coli'' ist der ''trp''-Promotor. [[1983]] wurde die ''−35-Region'' des ''trp''-Promotors mit der ''−10-Region'' eines anderen Promotors – des ''lac''-Promotors – [[in vitro]] kombiniert.<ref>de Boer, H.A. et al. (1983): ''The tac promoter: a functional hybrid derived from the trp and lac promoters.'' In: ''Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.'' Bd. 80, S. 21–25. PMID 6337371 [http://www.pnas.org/cgi/reprint/80/1/21.pdf PDF]</ref> Es wurde also ein sogenannter ''Hybridpromotor'' konstruiert, der ''tac''-Promotor. Es zeigte sich, dass der ''tac''-Promotor ebenso wie der ''lac''-Promotor durch [[Isopropyl-β-D-thiogalactopyranosid|IPTG]] und [[Laktose]] reguliert werden kann, das heißt, die mRNA-Synthese an diesem Promotor wird durch die Zugabe dieser Substanzen induziert. Diese Regulierbarkeit der Genexpression ist wichtig, da viele Fremdproteine toxisch für die Wirtszelle sind.

Ferner konnte gezeigt werden, dass der ''tac''-Promotor ''3-mal'' stärker als der ''trp''-Promotor und ''10-mal'' stärker als der lac-Promotor ist, eine ideale Voraussetzung für Experimente zur Proteinüberexpression.

== Literatur ==
<references/>

[[Kategorie:Desoxyribonukleinsäure|Tac-Promoter]]