Quelltext der Seite Epitopkartierung

Die '''Epitopkartierung''' (engl. {{lang|en|''epitope mapping''}}) beschreibt die Bestimmung von [[Epitop]]en auf [[Antigen]]en. Darunter befinden sich sowohl [[Haupthistokompatibilitätskomplex|MHCI]]-gebundene Epitope, die durch den [[T-Zell-Rezeptor]] auf [[Cytotoxische T-Zelle|cytotoxischen T-Zellen]] erkannt werden, als auch MHCII-gebundene Epitope, die durch [[CD4]]-positive T-Zellen erkannt werden sowie lösliche oder [[Zellmembran]]-gebundene Antigene, deren Epitope durch [[Antikörper]] von [[B-Zelle]]n erkannt werden. Die Epitopkartierung dient der Identifikation von [[immundominant]]en Epitopen für potentielle [[Impfstoff]]e sowie der Entwicklung [[Therapeutikum|therapeutischer]] und [[Diagnostikum|diagnostischer]] Präparate.

== Bestimmung diskontinuierlicher Epitope ==
[[Datei:Recognition of conformational epitopes by B cells.PNG|mini|Erkennung von diskontinuierlichen Epitopen durch Antikörper.]]
Antikörper können sowohl kontinuierliche als auch diskontinuierliche Epitope erkennen. Die Bestimmung beider Arten von Epitopen kann durch [[Kristallstrukturanalyse|Röntgen-Kristallstrukturanalyse]] oder durch [[Kernspinresonanzspektroskopie]] erfolgen, seltener auch durch einen [[Label-Transfer]], ein [[Protection Assay]] oder einen [[Alanin-Scan]].

== Bestimmung kontinuierlicher Epitope ==
[[Datei:Schematic diagram showing Polyclonal Response by B cells against Linear Epitopes.PNG|mini|Erkennung von kontinuierlichen Epitopen durch Antikörper.]]
Kontinuierliche Epitope von Antikörpern können per [[ELISPOT]] oder durch synthetische [[Peptide]] nachgewiesen werden, die zuvor räumlich getrennt auf einer [[Membran (Trennschicht)|Membran]] (z.&nbsp;B. aus [[PVDF]] oder [[Cellulose]]) immobilisiert oder per [[Merrifield-Synthese]] auf der Membran synthetisiert wurden. Durch eine [[Immunfärbung]] werden dann nach der Zugabe des Antikörpers und einigen Waschschritten mit einem [[Sekundärantikörper]]-Konjugat antikörperbindende Epitope nachgewiesen.

T-Zell-Epitope sind ausschließlich kontinuierliche Epitope. Während MHC-I-präsentierte Epitope eine Länge von acht bis elf [[Aminosäuren]] aufweisen, sind MHC-II-präsentierte Epitope 13–17 Aminosäuren lang. T-Zell-Epitope von cytotoxischen und von Helfer-T-Zellen können per ELISPOT oder per [[Tetramer]]-Färbung in der [[Durchflusszytometrie]] ermittelt werden. Bei einem zu charakterisierenden Protein werden Peptide in der gewünschten MHC-bindenden Länge synthetisiert, welche die gesamte Sequenz des [[Protein]]s abdecken. Um keine Epitope an den Rändern der Peptide zu verpassen, verwendet man meistens eine Überlappung der Peptide von fünf Aminosäuren (bei MHC-I) bis acht (bei MHC-II) zu den in der Aminosäuresequenz benachbarten Peptiden.

Bei cytotoxischen T-Zellen kann auch die Freisetzung von [[Radioaktivität|radioaktivem]] [[Chrom|<sup>53</sup>Chrom]] aus Chrom-enthaltenden und (je Ansatz) mit einem Epitop-beladenen Opferzellen nach Zugabe der cytotoxischen T-Zellen gemessen werden. Alternativ zu Chrom können die antigenbeladenen Opferzellen auch [[Fluoreszenzmarkierung|fluoreszenzmarkiert]] und ihre [[Zellviabilität]] verfolgt werden. Weiterhin kann auch die Entstehung von [[Perforin]] oder [[Granzyme|Granzym B]] gemessen werden.

[[T-Helferzelle]]n [[Sekretion|sezernieren]], je nach Typ, nach einem Kontakt mit MHCII-präsentierten Antigenen charakteristische [[Zytokine]], die anstelle des Chroms per [[ELISA]] gemessen werden können.

== Vorhersage ==
Eine begrenzte Voraussage der MHC-Bindung von Peptiden wird unter anderem durch das Programm SYFPEITHI oder durch die [[IEDB]] angeboten. IEDB bietet eine aktuelle Datenbank beschriebener Epitope an. Diese Vorhersagen treffen nur meistens zu, daher muss eine experimentelle Überprüfung der Epitope folgen.<ref>M. Y. Lee, J. W. Jeon, C. Sievers, C. T. Allen: ''Antigen processing and presentation in cancer immunotherapy.'' In: ''Journal for immunotherapy of cancer.'' Band 8, Nummer 2, 08 2020, {{DOI|10.1136/jitc-2020-001111}}, PMID 32859742, {{PMC|7454179}}.</ref>

== Literatur ==
* [[Charles Janeway]] et al.: ''Immunobiology''. 6. Auflage ISBN 0-8153-4101-6. Die 5. englische Ausgabe ist online auf den Seiten des [[National Center for Biotechnology Information|NCBI]]-Bookshelf verfügbar, [http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bv.fcgi?call=bv.View..ShowTOC&rid=imm.TOC&depth=10 (online)].
* [[Hans-Georg Rammensee]], Jutta Bachmann, Stefan Stevanović: ''MHC ligands and peptide motifs''. Landes Bioscience, Georgetown, Tx 1997. (International distributor – except North America: Springer Verlag GmbH & Co. KG, Tiergartenstr. 17, D-69121 Heidelberg)
* Hans-Georg Rammensee, Jutta Bachmann, Niels Nikolaus Emmerich, Oskar Alexander Bachor, Stefan Stevanović: SYFPEITHI: database for MHC ligands and peptide motifs. In: ''Immunogenetics'' (1999), Bd. 50(3-4), S. 213-9. PMID 10602881.
* Randi Vita, Laura Zarebski, Jason A. Greenbaum, Hussein Emami, Ilka Hoof, Nima Salimi, Rohini Damle, Alessandro Sette, Björn Peters: The immune epitope database 2.0. In: ''[[Nucleic Acids Research]]'' (2010), Bd. 38(Database issue):D854-62. PMID 19906713; {{PMC|2808938}}.

== Weblinks ==
* [http://www.iedb.org/ IEDB-Website]
* [http://www.syfpeithi.de/ SYFPEITHI-Website]

== Einzelnachweise ==
<references />

[[Kategorie:Immunologie]]
[[Kategorie:Biochemische Methode]]