Quelltext der Seite Enzymatische Analyse

Der Begriff '''enzymatische Analyse''' betrifft zwei unterschiedliche Verfahren in der [[analytische Chemie|analytischen Chemie]]:<ref name="Matissek">{{bibISBN|978-3-540-92205-6|Seite=365–370}}</ref>
* [[Quantifizierung]] von Substanzen ([[Substrat (Biochemie)|Substraten]]) mit [[Enzym]]en
* Ermittlung der [[Katalysatoraktivität|Enzymaktivitäten]]

== Prinzip ==
Enzymatische Reaktionen folgen dem allgemeinen Schema:
:<math>\mathrm{Substrat + Coenzym \ \xrightarrow{Enzym} \ Produkt + Coenzym'}</math>
Hierbei hat das Enzym die Funktion eines [[Katalysator]]s, der die Umsetzung des zu bestimmenden Substrats mit einem [[Coenzym]] beschleunigt. Die Enzyme haben hierbei unterschiedliche Spezifitäten, die nur auf eine Substanz wirksam sind und gruppenspezifische (z.&nbsp;B. nur für [[Oligosaccharide]]) oder stereospezifische (Umsetzung nur einer [[stereoisomer]]er Form).<ref name="Matissek" />
[[Datei:NAD-NADH-Absorptionskurven.svg|miniatur|Absorptionskurven von NADH und NAD<sup>+</sup>]]
Das Coenzym hingegen ist häufig identisch. Häufig auftretende Coenzympaare sind [[Nicotinamidadenindinukleotid|NADH]]/NAD<sup>+</sup> oder [[Nicotinamidadenindinukleotidphosphat|NADPH]]/NADP<sup>+</sup>. Die [[Reduktion (Chemie)|reduzierte]] Form (NADH oder NADPH) zeigt gegenüber der [[Oxidation|oxidierten]] (NAD<sup>+</sup>/NADP<sup>+</sup>) ein zusätzliches Absorptionsmaximum bei 340&nbsp;nm, was sich [[Photometrie|photometrisch]] auswerten lässt. Weil die umgesetzte Menge Coenzym zum Substrant äquivalent ist, kann so eine indirekte Bestimmung erfolgen.<ref name="Matissek" />

Wenn kein geeignetes Farbstoff-bildendes Substrat zur Verfügung steht, kann der enzymatische Nachweis auch an die Reaktionen weiterer Enzyme gekoppelt werden, die eine Farbänderung (beispielsweise über NAD<sup>+</sup>) erzeugen. Dieses Prinzip bezeichnet man nach [[Otto Warburg (Biochemiker)|Otto Warburg]] als ''zusammengesetzten enzymatischen Nachweis''.

== Durchführung ==
Es wird in der Regel [[Blindwert]] und [[Analysenprobe]] nach 5 bis 10 Minuten Einwirkzeit des Enzyms vermessen und die Extinktionsdifferenz berechnet, die als Maß für den Verbrauch an Coenzym her hält. Einige Bioanalytik-Dienstleister bieten UV-Testsätze mit fertigen Reagenzien an.<ref name="Matissek" />

== Anwendungsgebiete ==
Da die enzymatischen Substratbestimmungen sehr spezifisch und empfindlich (Messung im [[parts per million|ppm]]-Bereich möglich) sind, kommt die Enzymatik in der [[Lebensmittelanalytik]] verstärkt zum Einsatz. Sie verbindet die Anforderung von Referenzmethoden, Schnellmethoden und Routinemethoden.
Von besonderer Bedeutung bei der Substratbestimmung ist die Analytik der [[Kohlenhydrate]] (insbesondere [[Glucose]], [[Fructose]], [[Mannose]], [[Saccharose]]), [[Organische Säuren|Organischer Säuren]] (insbesondere [[Äpfelsäure]], [[Citronensäure]]), [[Alkohole]] und [[Stickstoff]]verbindungen.<ref name="Matissek" /> Auch in der medizinischen '''Enzymdiagnosik'''<ref>[[Christa Habrich]]: ''Zur Geschichte der klinischen Enzymdiagnostik und ihren naturwissenschaftlichen Voraussetzungen.'' In: Christa Habrich, Frank Marguth, [[Jörn Henning Wolf]] (Hrsg.) unter Mitarbeit von [[Renate Wittern-Sterzel|Renate Wittern]]: ''Medizinische Diagnostik in Geschichte und Gegenwart.'' Festschrift für [[Heinz Goerke]] zum sechzigsten Geburtstag. München 1978 (= ''Neue Münchner Beiträge zur Geschichte der Medizin und Naturwissenschaften: Medizinhistorische Reihe.'' Band 7/8), ISBN 3-87239-046-5, S. 549–572.</ref> hat die enzymatische Analyse ihren Platz.

Die Ermittlung der Enzymaktivität zur Prüfung auf das Vorhandensein von Enzymen kann beginnenden [[Verderb]] anzeigen und somit ein Indikator für den Frischezustand sein.<ref name="Matissek" />

== Einzelnachweise ==
<references />

[[Kategorie:Biologische Untersuchungsmethode]]
[[Kategorie:Lebensmittelanalytik]]