Pulldown-Assay

2019-06-10T11:47:50Z

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Ein '''Pulldown-Assay''' ist eine Methode, die in der [[Biochemie]] verwendet wird, um ''[[in vitro]]'' Bindungen zwischen [[Makromolekül]]en, meist [[Protein-Protein-Interaktion]]en, nachzuweisen. Die Methode kann verwendet werden, um für ein vorhandenes Zielmolekül (engl. ''bait'' ‚Köder‘) einen oder mehrere Interaktionspartner (engl. ''prey'' ‚Beute‘) zu identifizieren, oder um mit [[Proteomik|anderen Methoden]], wie z. B. dem [[Yeast Two-Hybrid System|Yeast Two-Hybrid-System]], nachgewiesene Interaktionen zu bestätigen.

== Prinzip ==
Pulldown-Assays basieren dabei auf der [[Affinität (Biochemie)|Affinität]] des ''bait''-Moleküls zu seinem ''prey''-Molekül, welches an einer Matrix gebunden ist. Hierzu wird das ''bait''-Molekül meist mittels der Generierung eines [[Fusionsprotein]]s mit einem [[Protein-Tag]] (engl. Etikett) versehen und über diesen an eine geeignete [[Chromatographie#Stationäre Phase|Matrix]] gebunden. Die Matrix besteht meist aus [[Vernetzung (Chemie)|quervernetztem]] [[Dextran]] oder [[Agarose]]. Nach der Zugabe möglicher Interaktionspartner, z. B. in Form eines [[Lyse (Biologie)|Zelllysats]] und geeigneten Waschschritten verbleiben die Interaktionspartner an das ''bait''-Molekül und damit an die Matrix gebunden und können anschließend [[Elution|eluiert]] und analysiert werden. Der Pull-Down-Assay ähnelt damit der [[Immunpräzipitation]], wobei der Protein-Tag die Funktion des [[Antikörper]]s übernimmt. Häufig verwendete Protein-Tags sind z. B. Hexa-[[Histidin]]-, [[Streptavidin]]- und [[Glutathion-S-Transferase]]-tags. Eine Variante des Pulldown-Assays ist das [[Strep-Protein Interaction Experiment]].

Neben dem klassischen Pulldown-Assay zum Nachweis von Protein-Protein-Interaktionen wurden auch gelegentlich ähnliche Methoden verwendet, um [[DNA]]-Protein-Wechselwirkungen zu untersuchen, wobei [[Biotin]]-markierte DNA-Proben über [[Streptavidin]] an die Matrix gebunden und als ''bait'' eingesetzt werden.<ref>{{Literatur |Autor=Kenneth K. Wu |Titel=Analysis of Protein-DNA Binding by Streptavidin-Agarose Pulldown |Sammelwerk=Methods in Molecular Biology |Band=338 |Datum=2006 |Seiten=281-290 |DOI=10.1385/1-59745-097-9:281}}</ref>

== Literatur ==
* [[Friedrich Lottspeich]], Haralabos Zorbas: ''Bioanalytik''. Spektrum Akademischer Verlag, Heidelberg 1998, ISBN 978-3-8274-0041-3.
* [[Hubert Rehm]], Thomas Letzel: ''Der Experimentator: Proteinbiochemie / Proteomics''. 6. Auflage, Spektrum Akademischer Verlag, Heidelberg 2009, ISBN 978-3-8274-2312-2.

== Weblinks ==
* {{Webarchiv |url=http://www.promega.com/guides/protein.interactions_guide/chap3.pdf |wayback=20071212062210 |text=Pull-down assays}} im Promega Protein Interaction Guide (engl.; PDF-Datei; 245 kB)
* [http://www.piercenet.com/Products/Browse.cfm?fldID=F3FD3612-415F-42A5-8922-736F9FDD36FB Pull-Down Assays] – Beschreibung bei Thermo Scientific

== Einzelnachweise ==
<references />

[[Kategorie:Protein-Protein-Interaktionsbestimmung]]
[[Kategorie:Biochemisches Trennverfahren]]

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Pulldown-Assay